2011-12-09
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島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（手動(dòng)進(jìn)樣+全反控+雙泵）
摘要
本文詳細(xì)介紹了島津LC-10AT型液相色譜儀（雙泵+手動(dòng)進(jìn)樣+全反控）系統(tǒng)的使用和操作要領(lǐng)，適用于初學(xué)者學(xué)習(xí)使用。
內(nèi)容
1．目的
規(guī)范島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)。
2．范圍
本規(guī)程適用于島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)的使用和維護(hù)。
3．職責(zé)
質(zhì)檢室儀器分析員負(fù)責(zé)島津LC-10AT型液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護(hù)。
4．規(guī)程
4.1 系統(tǒng)組成：本系統(tǒng)由2個(gè)LC-10ATvp溶劑輸送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥、SPD-10Avp紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器、SCL-10AVP系統(tǒng)控制器、CLASS-VP（Ver. 6.1）工作站和IBM臺(tái)式電腦等組成。
4.2 準(zhǔn)備
4.2.1使用前應(yīng)根據(jù)待檢樣品的檢驗(yàn)方法準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾，超聲脫氣20min。
4.2.2 根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（柱進(jìn)出口位置應(yīng)與流動(dòng)相流向一致）和定量環(huán)。
4.2.3 配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾。
4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。
4.3 開(kāi)機(jī)
4.3.1接通電源，依次開(kāi)啟不間斷電源、B泵、A泵、檢測(cè)器、系統(tǒng)控制器，待泵和檢測(cè)器自檢結(jié)束后，打開(kāi)電腦顯示器、主機(jī)。
4.3.2啟動(dòng)CLASS-VP工作站
4.3.2.1確認(rèn)儀器、系統(tǒng)控制器啟動(dòng)后，打開(kāi)計(jì)算機(jī)電源，并從Windows的任務(wù)欄中選擇Start > Programs > Chromatography > CLASS-VP以打開(kāi)CLASS-VP菜單窗口。（可以通過(guò)桌面上的快捷方式，迅速打開(kāi)CLASS-VP主菜單）
4.3.2.2 在Main Menu 窗口中雙擊Instrument圖標(biāo)。
4.3.2.3 輸入用戶名和口令，以登錄CLASS-VP。缺省情況下，已經(jīng)用戶名和口令分別為“system”和“2001”。
4.3.2.4 當(dāng)SCL-10Avp發(fā)出蜂鳴聲后，說(shuō)明已建立與計(jì)算機(jī)之間的連接，Instrument窗口打開(kāi)。
4.3.2.5 啟動(dòng)色譜圖監(jiān)視器
4.3.2.5.1 從Windows任務(wù)欄中選擇Program> Chromatography > Chromatogram Monitor 以打開(kāi) Chromatogram Monitor 窗口。
4.3.2.5.2 根據(jù)需要設(shè)置受監(jiān)視項(xiàng)的類型和格式。
4.3.2.6 啟動(dòng)脫機(jī)處理
4.3.2.6.1 在 Main Menu 窗口中雙擊 Offline Processing 圖標(biāo)。
4.3.2.6.2 雙擊為數(shù)據(jù)采集而設(shè)置的儀器名稱，以打開(kāi)儀器進(jìn)行脫機(jī)處理。
4.4 CLASS-VP初始系統(tǒng)設(shè)置（設(shè)置方法缺省參數(shù)）
4.4.1 單擊“New”按鈕，并接著單擊 New Method 即可初始化方法參數(shù)。
4.4.2 從Option 選項(xiàng)卡的Method菜單中選擇命令，并在對(duì)話框中更改每條命令的參數(shù)，以選擇常用的選項(xiàng)。
4.4.3 選擇File > Method > Save as Default 即可將在此處設(shè)置的選項(xiàng)保存成缺省參數(shù)。
4.5 設(shè)置分析參數(shù)
4.5.1 設(shè)置LC參數(shù)
4.5.1.1 設(shè)置新的分析參數(shù)時(shí)，請(qǐng)從通過(guò)單擊“New”按鈕打開(kāi)的列表中選擇New Method，則將加載缺省方法參數(shù)，且方法文件名“Untitled.met”將顯示在LC Setup Assistant窗口中，通過(guò)單擊Open按鈕即可打開(kāi)現(xiàn)有的方法文件。
4.5.1.2 通過(guò)在LC Setup Assistant窗口中單擊泵和檢測(cè)器的圖標(biāo)來(lái)配置LC參數(shù)。使用時(shí)鐘圖標(biāo)輸入時(shí)間程序命令。
4.5.1.3 選擇 File > Method > Save as 并輸入方法名稱。
4.5.2 將方法下載到SCL-10Avp：完成創(chuàng)建方法之后，單擊下面的圖標(biāo)即可將該方法下載到SCL-10Avp上。下載完成時(shí)，出現(xiàn)一個(gè)消息窗口，請(qǐng)單擊OK。
4.5.3 啟動(dòng)儀器控制：激活SCL-10Avp，將液體流量調(diào)整到已下載的方法參數(shù)。當(dāng)所有組分穩(wěn)定時(shí)，出現(xiàn)“Ready”指示燈，且狀態(tài)欄變?yōu)榫G色。
4.5.4 設(shè)置方法（斜率）：
4.5.4.1 請(qǐng)?jiān)跈z測(cè)器的基線穩(wěn)定之后選擇Control > Preview Run或單擊工具欄上的“Preview”按鈕。
4.5.4.2 單擊數(shù)據(jù)圖形之后，再在Integration工具欄上單擊“SLOPE”按鈕，即可從基線測(cè)量斜率的參考值。
4.5.4.3 單擊SLOPE對(duì)話框中的Add to table按鈕，即可在Method > Integration Events 表中記錄此設(shè)置。
4.5.5 設(shè)置方法（自定義報(bào)告）：?jiǎn)螕艄ぞ邫谏系?ldquo;Report”按鈕，打開(kāi)Method Custom Report窗口；單擊“Open”按鈕，然后選擇Open Report Temlate 打開(kāi)一個(gè)模板文件。
4.5.6 保存已更改的方法：要當(dāng)前名稱保存方法文件，亦即覆蓋原來(lái)的名稱，請(qǐng)從菜單中選擇File > Method > Save 命令，或單擊“Save”按鈕，然后單擊下拉菜單上的Save Method。4.6 平衡系統(tǒng)
4.6.1系統(tǒng)的操作
4.6.1.1基線檢查
4.6.1.2 單擊LC Setup Assistant 窗口中 “Baseline Check”按鈕。
4.6.1.3 測(cè)量噪音和漂移的起始時(shí)間和結(jié)束時(shí)間，對(duì)于Noise 的Threshold值，請(qǐng)輸入期望的滿刻度值的大約1/100；對(duì)于Drift的Threshold值，請(qǐng)輸入1/10。單擊Start開(kāi)始測(cè)量。測(cè)量結(jié)束后，測(cè)得的噪音值和漂移值將出現(xiàn)在Status區(qū)域里。
4.6.1.4 采集數(shù)據(jù)之前要檢查基線，如果基線檢查檢查合格，即可立即開(kāi)始采集。如果Export on Fail 對(duì)話框已經(jīng)選中，并且在的Maximum時(shí)間內(nèi)重復(fù)進(jìn)行基線檢查仍然失敗，則不會(huì)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。
4.6.1.5 啟動(dòng)和關(guān)閉單擊LC Setup Assistant 窗口中的Startup/Shut Down 按鈕。
4.6.1.5.1設(shè)置啟動(dòng)條件
4.6.1.5.1.1 在Startup窗口中啟動(dòng)的Date and Time，當(dāng)達(dá)到的日期和時(shí)間時(shí)即可下載的方法文件參數(shù)。
4.6.1.5.1.2 如果此處未指明方法文件，則使用zui近使用的方法文件。如果需要，請(qǐng)?jiān)贠ffline Processing窗口中創(chuàng)建一個(gè)用于啟動(dòng)的方法文件，并在此處它。
4.6.1.5.2 設(shè)置關(guān)閉條件
4.6.1.5.2.1在Offline Processing 模式下創(chuàng)建一個(gè)用于關(guān)閉的方法。通常情況下需要將泵的流速設(shè)置到低（或?yàn)榱悖?，并且需要關(guān)閉檢測(cè)器的燈管，等等。用一個(gè)新的文件名將此方法保存到磁盤上。
4.6.1.5.2.2 單擊Shut Down窗口中“Open”按鈕以選擇關(guān)閉方法文件。另外，如果需要，也可選中或取消選中“Sample Cooler OFF”或“Degasser OFF After Cool Down”選項(xiàng)。
4.6.2 等度洗脫方式
4.6.2.1 按A泵的[pump]鍵，A、B泵將同時(shí)啟動(dòng)，pump指示燈亮。用檢驗(yàn)方法規(guī)定的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)，一般zui少需6倍柱體積的流動(dòng)相。
4.6.2.2 檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。
4.6.2.3 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動(dòng)應(yīng)不超過(guò)1MPa。如超過(guò)則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按4.5.6操作。
4.6.2.4 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時(shí)，可認(rèn)為系統(tǒng)已達(dá)到平衡狀態(tài)，可以進(jìn)樣。
4.6.3 梯度洗脫方式
4.6.3.1 以檢驗(yàn)方法規(guī)定的梯度初始條件，按4.6.2項(xiàng)下方法平衡系統(tǒng)。
4.6.3.2 在進(jìn)樣前運(yùn)行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]鍵，prog.run指示燈亮，梯度程序運(yùn)行；程序停止時(shí)，prog.run指示燈滅。
4.7 進(jìn)樣、采集運(yùn)行
4.7.1 進(jìn)樣
4.7.1.1進(jìn)樣前按檢測(cè)器[zero]鍵調(diào)零，按軟件中 [零點(diǎn)校正] 按鈕校正基線零點(diǎn)，再按一下 [查看基線] 按鈕使其彈起。
4.7.1.2用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。
4.7.2采集運(yùn)行
4.7.2.1從菜單欄中選擇 Control > Show Tray?；蛘?，單擊LC Setup Assistant窗口中的“Single Run”按鈕或工具欄上的Single Run按鈕。所需的項(xiàng)并單擊Start按鈕。
4.7.2.2 記錄自動(dòng)啟動(dòng)和關(guān)閉：?jiǎn)螕鬖C Setup Assistant窗口中的Start/Shut Down按鈕。在Start/Shut Down對(duì)話框中單擊需要記錄的Startup、Shut Down和 Startup/Shut Down中的任一按鈕并確認(rèn)或更改設(shè)置。單擊Submit按鈕進(jìn)入待機(jī)對(duì)話框，該對(duì)話框停留在屏幕上等候執(zhí)行設(shè)置。
4.7.2.3終止采集
4.7.2.3.1 延長(zhǎng)運(yùn)行時(shí)間：選擇Control > Extend Run并輸入添加到運(yùn)行結(jié)束的時(shí)間值。要縮短采集時(shí)間，請(qǐng)一個(gè)負(fù)值。（對(duì)當(dāng)前采集有效）
4.7.2.3.2 緊急停機(jī)
4.7.2.3.2.1 采集過(guò)程中，單擊工具欄上的“Stop Run”按鈕。接著就會(huì)出現(xiàn)一條消息，詢問(wèn)您是否“Abort the current run”,如果單擊Yes，當(dāng)前的數(shù)據(jù)采集就會(huì)終止。
4.7.2.3.2.2 如果在隨后出現(xiàn)的消息上單擊Yes, 剩余的采集就不會(huì)再運(yùn)行，序列就會(huì)終止。如果單擊No, 剩余的采集就會(huì)開(kāi)始運(yùn)行。
4.8更換流動(dòng)相并排氣泡
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4.8.1 將A/B管路的吸濾器放入裝有準(zhǔn)備好的流動(dòng)相的儲(chǔ)液瓶中；
4.8.2 逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)A/B泵的排液閥180°，打開(kāi)排液閥；
4.8.3 按A/B泵的[purge]鍵，pump指示燈亮，泵大約以9.9ml/min的流速?zèng)_洗，3min（可設(shè)定）后自動(dòng)停止；
4.8.4 將排液閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。
4.8.5 如管路中仍有氣泡，則重復(fù)以上操作直至氣泡排盡。
4.8.6 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)流速為5ml/min，按[pump]鍵，沖洗3min后再按[pump]鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。
4.9 清洗系統(tǒng)和關(guān)機(jī)
4.9.1 數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉檢測(cè)器，繼續(xù)以工作流動(dòng)相沖洗10min后，換水沖洗。
4.9.2 清洗進(jìn)樣閥
4.9.2.1 用啟動(dòng)注射器吸10ml超純水；
4.9.2.2 將注射針導(dǎo)入口沖洗頭（Rheodyne部件號(hào)7125-054）連接到注射器出口上（不要針），并將它們一起接到進(jìn)樣口上；
4.9.2.3 使進(jìn)樣閥保持在Inject位置，慢慢將水推入，水將通過(guò)注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈，由樣品溢出管排出。
4.9.3 清洗柱
4.9.3.1 C18柱先用超純水以1ml/min沖洗40min以上，再用甲醇或乙腈沖洗20min。
4.9.3.2 Protein PAK60柱先用超純水沖洗90min以上，再用甲醇或乙腈沖洗40min。
4.9.4 用水沖洗柱后，分別用20ml超純水沖洗柱塞桿外部和法蘭盤上小孔。
4.9.5 清洗完成后，先將流速降到0，再依次關(guān)閉泵、脫氣機(jī)、UPS，斷開(kāi)電源。
4.9.6 填寫使用記錄。
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